德国美天旎生物技术公司BOB

发布时间：2024-01-31 丨 浏览次数：

　　BOB图像数据采集和分析为深入分析高度异质的肿瘤细胞和可塑多变的肿瘤微环境提供了宝贵的空间分布信息，这是传统组化或2D成像的方法无法企及的，伴随样本前期制备必需步骤切片而带来伪信号、人为偏碍和后期数据叠加拟合引入误差等因素带来巨大局限性。三维整体光片成像该技术为肿瘤免疫治疗药物开发早期阶段开展药物递送途径、监测免疫细胞浸润等研究提供更直观的数据依据。光片成像与免疫细胞浸润示踪以CAR-T细胞用于实体肿瘤治疗为例，CAR-T细胞向肿瘤实体内部有效浸润、分布及持续存在时间是开发构建CAR-T细胞早期的重要评价依据，但现有研究技术缺乏能获取相关数据的方案，更无法使之可视化。在用于胰腺癌细胞治疗方案前期开发中，科学家构建了­CD66c-LNGFR+ 的二代CAR T细胞，并采用较长波长可激发的荧光染料Vio® 667 Dye对之进行标记（可有效提升光片成像信号强度并降低信噪比）。三维成像图中可清晰观察到实体肿瘤内部坏死区域（黑色无信号），­CD66c-LNGFR+ CAR-T治疗可令肿瘤血管化程度明显提高（Rhodamin-Lectin标记血管）但该CAR-T细胞不具备较好浸润肿瘤实质的作用（Vio667仅位于肿瘤表层的信号分布）。三维立体成像效果：类器官3D光片成像在当前领先的肿瘤类器官在个体化治疗的药物筛选应用中，类器官鼻祖Hans Clevers也极为认同三维整体成像技术能更好提取类器官立体空间中特定细胞位置与分化的关系，是类器官研究的技术趋势。同时结合高通量成像方法，可有效降低不同实验批次的组内差异，为获得治疗有效性预测提供稳定可靠的依据。网络直播课程作为目前较领先的成像技术，完整组织三维光片成像技术尚未普及。基于当前最先进光片成像系统美天旎UltraMicroscope和在肿瘤免疫学的专业积淀，我们将介绍当前最为领先的完整组织三维立体成像的方法实现高分辨率的实体肿瘤微环境可视化分析。此次网络课程包含如下内容：大样本组织三维立体光片成像的基本原理满足光片成像的样本制备解析大样本组织三维立体光片成像技术在肿瘤免疫学中的应用概述如何针对多个肿瘤样本进行图像采集及数据分析实例展示光片成像在细胞浸润肿瘤实体并进行示踪的应用识别描下方二维码免费注册观看直播（可收看直播和回放）

　　皮肤在构建屏障防御病原入侵及环境威胁中扮演重要角色，归功于皮肤内由免疫细胞及非免疫细胞构建的复杂网络结构维持了皮肤免疫及稳态。皮肤面对外部抗原刺激时，多种免疫细胞共同发挥协调达到维持皮肤稳态的目的。树突细胞（包括表皮Langerhans细胞）获取抗原并迁移至淋巴结完成向幼稚T细胞呈递抗原的作用，这是去除获得性皮肤免疫响应的关键步骤，如接触性皮炎的发生。中性粒细胞 在皮肤损伤及炎症发生后，通过位于毛细血管的巨噬细胞的招募作用，可快速迁移至组织损伤部位发挥对抗并清除细菌的功能。应用创新的3D显微成像技术对完整皮肤样本进行整体成像，研究者得以对皮肤内免疫细胞的分布、结构组成及血管分布获得宏观的图像数据并加以分析。 此次新加坡科学专业期刊”The Scientist”联合美天旎共同推出网络研讨会，主题内容包括：✦ 皮肤内白细胞及其迁移的作用和意义✦ 多光子成像及大规模光片显微成像在皮肤免疫研究中的应用✦ 将完整皮肤的成像技术开拓至临床应用收看在线✦ 扫描二维码观看直播：           演讲嘉宾简介Lai Guan Ng, PhDAdjunct Associate Professor, National University of SingaporeAdjunct Associate Professor, Nanyang Technological University Lai Guan Ng自2009年加入新加坡免疫网络研究所 (Singapore Immunology Network, SIgN)担任主要研究员，专注从事组织器官内驻留免疫细胞功能的研究。带领研究小组开发了用于研究白细胞发育分化和白细胞迁移、稳态维持相关细胞及分子学机制的活体成像技术，该技术已成功应用于皮肤、骨髓、肺、脑和肌肉等多种组织和器官内的免疫细胞功能研究。  除了此次研讨会介绍皮肤免疫学的研究进展及临床转化前景，Lai Guan Ng教授研究小组在新型光学成像技术的应用具有地位，如下是小鼠肺部的完整三维成像，“凭借UltraMicroscope II 提供的快速成像及16-bit深度影像数据，完整肺部的细微结构清晰重构。过去5年里，这台光片显微镜也为我们基于肝、肺、胚胎和人类皮肤等的研究提供了大量卓越的图像。”Yingrou TanNational Skin Centre/ Singapore Immunology Network Research Postdoctoral Researcher美天旎中国免费热线 产品咨询与技术支持邮箱：tec

　　当前最炙手火热的免疫检查点阻断剂（Immune Checkpoint Blockade, ICB）已在多种实体肿瘤、甚至较晚期的肿瘤治疗亦均得不错的效果。即便如此，仍只有15-30%的临床肿瘤案例可获益于这一新型免疫疗法；更值得关注的是，部分病患在接受了PD-1 阻断剂治疗后出现病程的恶化（Hyperprogression），这一现象在晚期消化道肿瘤患者中高达10%。什么机制限制了免疫疗法的可靠性和有效性？肿瘤浸润TregFOXP3+调节性T细胞（Treg）是一群具有免疫抑制功能的CD4+ T细胞。FoxP3+CD4+ 细胞同样具有表型和功能的异质性，可大体分为三类：Naive Treg cells (CD45RA+CD25lowFoxP3lowCD4+);Effector Treg (eTreg) cells (CD45RA–CD25highFoxP3highCD4+);non-Treg cells (CD45RA–CD25lowFoxP3lowCD4+)Treg可向实体肿瘤内部浸润，且CTLA-4高表达的eTreg细胞是浸润入实体肿瘤的主要Treg亚型。在人多种组织来源的肿瘤内均发现有大量Treg浸润，特别是在乳腺肿瘤、消化道肿瘤和卵巢肿瘤预后较差的案例中通常出现肿瘤内CD8+T /Treg 比例降低的现象；同时，在头颈肿瘤、肾肿瘤、乳腺肿瘤和黑色素瘤等绝大多数实体肿瘤内，均发现肿瘤浸润FOXP3+细胞的比例与病人的生存率成负相关【1】；临床数据显示，基于另一免疫检查点CTLA-4的阻断药物Ipilimumab，其病患预后也与肿瘤内Treg数量减少密切相关【2,3】这些均提示Treg是阻碍肿瘤免疫疗法疗效的重要细胞类群。同时已有研究发现，除了浸润入肿瘤实体的激活和耗竭的CD4+和CD8+ T细胞表达有PD-1，Treg同样表达有PD-1。因此，PD-1阻断剂对实体瘤的作用便不能简单描述为增强肿瘤浸润杀伤T细胞功能进行杀瘤。PD-1阻断剂对瘤内浸润Treg细胞的作用机制如何，造成何种临床结果便成了需要回答的核心问题，对深入了解复杂的肿瘤微环境并进行有效调控提出更高的要求。特异性靶向效应Treg细胞、解除实体肿瘤内的免疫抑制环境，而不引起广泛的自身耐受，是开发新型免疫疗法、优化已有免疫治疗方案的挑战，因此，肿瘤微环境基础研究和实体瘤治疗产品开发成为肿瘤免疫领域的关注热点。肿瘤微环境与实体瘤治疗CAR-T细胞疗法因其不受MHC类型限制，无需DC细胞抗原呈递激活等优势，已证实其在血液系统肿瘤治疗领域的变革型突破。然而，CAR-T应用于实体瘤治疗仍面临巨大的挑战：实体瘤具备纤维结构的物理屏障，肿瘤内部低氧、低pH、营养缺陷、高渗透压的环境且缺乏成熟的血管，这些因素均限制了CAR-T细胞向实体肿瘤的有效浸润；加之肿瘤微环境内大量抑制性细胞（如Treg, MDSC）的存在，都导致了目前基于CAR-T、TCR-T的实体瘤治疗临床试验给药剂量远大于血液肿瘤CAR-T用量的结果（如Kymriah通常用量的级别在106/kg，总量在108数量级或更少；实体瘤CAR-T总量在109-1010的数量级）。开发能表达IL-2，1L-18等功能的所谓“Armored CAR-T” 也是在增加杀伤细胞的有效浸润下功夫。相约金秋 共话实体肿瘤前沿科学与转化会议聚焦实体肿瘤微环境的探索、靶向实体瘤治疗的新型免疫细胞疗法开发中的技术难点与行业进展。研讨会特邀上海市免疫学研究所副所长李斌研究员担任此次研讨会主席并作会议主旨报告BOB，介绍研究组在FOXP3+ Treg细胞功能可塑性及稳定性分子机制研究，及组织特异性、特别是肿瘤微环境中FOXP3+ Treg功能与炎性驱动肿瘤相关新进展。另外新型免疫疗法开发的业界领军人物齐聚，旨在打造科研学者和产业界伙伴分享研究进展，建立地区性乃至全球性的交流与合作，让“Make Cancer History” 的脚步向前迈进。时间：11月12日  12：00—19：30地点：上海浦东新区张衡路1077 号（ATLATL创新研发中心） 报名方式扫描下方二维码即可提交报名BOB。因现场名额有限，本次研讨会采用审核报名制，工作人员会在一周内告知审核结果，敬请谅解。我们诚挚期待您的参与！参考文献：【1】     Shang B, Liu Y, Jiang S, Liu Y. Prognostic value of tumor-infiltrating FoxP3+ regulatory T cells in cancers: a systematic review and meta-analysis. Sci Rep 2015; 5:15179.【2】     Simpson TR, Li F, Montalvo-Ortiz W, et al. Fc-dependent depletion of tumor-infiltrating regulatory T cells co-defines the efficacy of anti-CTLA-4 therapy against melanoma. J Exp Med 2013; 210:1695-1710.【3】     Hodi FS, Butler M, Oble DA, et al. Immunologic and clinical effects of antibody blockade of cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 in previously vaccinated cancer patients. Proc Natl Acad Sci USA 2008; 105:3005-3010.

　　美天旎八月流式系列直播课堂集结令，美天旎产品技术专家齐上阵，为您带来一场流式细胞术盛宴，为您的流式细胞实验助力！ 第一期：流式应用新场景  （8月6日）流式细胞分析基本介绍, 并且带您了解其新应用方向！主讲人：廖美智 博士   产品经理第二期：流式样品制备注意事项  （8月13日）从组织或血液获得高品质流式实验样品的要点主讲人：陈韦伶  科研应用科学家第三期：流式抗体选择套路（8月20日）如何选择何适的流式抗体与荧光素主讲人：陈靓   产品专员第四期：流式上样盲点分析（8月27日）细胞染色与流式上样过程的tips主讲人：胡玲娜 博士   科研应用科学家 8月每周四下午3：00——3：30，美天旎直播间不见不散！最近一期课程：

　　6月18日深圳湾实验室（生命信息与生物医药广东省实验室）揭牌成立，正式入驻光明区高科国际创新中心。“对标一流，建成生命健康创新高地”是深圳湾实验室主任詹启敏院士对深圳湾实验室的定位和愿景。詹院士表示：“深圳湾实验室要突出原始创新，形成国际制高点，早日建成具有国际和国内重大影响力的一流生命信息和生物医药创新高地。”按照规划，深圳湾实验室将整合粤港澳大湾区、全国乃至全球优势力量，依托现有五大核心技术平台，即：国家超级计算深圳中心药物筛选平台精准医学影像大设施脑解析与脑模拟重大科技基础设施合成生物研究重大科技基础设施主攻肿瘤、代谢、心血管、神经退行性疾病等重大疾病的预防和干预，开展具有重大引领作用的前沿大科学协同攻关，形成涵盖生命科学领域重大疾病防治、基础健康保障服务和前沿医疗技术突破的整体布局，建设平台型、开放型、自主型新型科研机构。根据规划，5年内将建设150个科研团队，人员规模达2000人，形成包括中外院士在内的各类领军人才梯级队伍。深圳湾实验室大事记2019/4/3正式揭牌2019/11/14深圳湾实验室与光明区人民政府签署合作协议2020/1/25紧急启动新型冠状病毒应急防治专项项目2020/06/18驻光明区高科国际创新中心3D成像技术应用广泛 大有可为美天旎UltraMicroscope全自动光片成像显微平台进驻深圳湾实验室，致力高分辨率超大样本整体三维显微成像分析，实现了在活体成像、神经环路动态分析、免疫系统支配、胚胎发育及心血管功能等应用中对整体空间分布信息的获取，克服了基于组织切片样本的传统成像方法的技术缺陷，助力科学家推动肿瘤、神经退行疾病及心血管等领域取得突破。顶级学术期刊Cell 于2019年12月刊以当期封面发表了来自德国慕尼黑Helmholtz再生医学中心的研究，报道了利用UltraMicroscope系列光片显微镜获取到完整动物体内所有肿瘤转移灶，包括小至单个肿瘤细胞的极微小转移灶的空间分布信息；并首次观察到单克隆抗体肿瘤药物在体内的系统分布和实际靶向肿瘤实体的情形，为当前肿瘤免疫学基础研究及新型免疫治疗药物开发及有效性验证开拓了新的视野。美天旎期待随着深圳湾实验室的不断发展，整合粤港澳大湾区、全国乃至全球优势力量，在当前全球聚焦的新冠免疫治疗方案和疫苗开发中取得突破，并以卓越的技术平台实现引领未来的前沿发现。

　　如果不出国门，就可以体验德国最新的细胞生物研究相关产品和技术，是不是很棒呢?美天旎中国体验中心 (MACS® Innovation and Training Center，MITC)，帮您实现这个心愿！接下来，就让小旎带大家认识我们中心常驻的仪器四大家族！样品制备与细胞分选家族gentleMACSTM，单次制备8个单细胞悬液样本BOB，标准化的程序让结果更稳定，是单细胞测序的必备工具。最重要的是，该仪器在中心可是免费使用的哦！MultiMACSTM CellSeparator 24 Plus, 单次实现24个样本的细胞分选，简单明了的操作提示让初学者秒变技术大拿！autoMACS® Pro, 全自动化细胞分选，完全解放您的双手。 流式分析/分选家族什么？美天旎还有流式细胞仪？小旎可要敲黑板了，我们不但有流式，而且还是个大家族呢！快来听听成员们的自我介绍吧BOB！经典畅销MACSQuant® 10，CAR-T分析标配就是我。MACSQuant® VYB，荧光蛋白分析的专家。MACSQuant® 16，优化的光路设计让您轻松驾驭更多流式配色。MACSQuant® X，最擅长高通量分析，384个样本1小时轻松搞定！让我和自动化工作站牵手，帮你实现无人操作高效率分析。MACSQuant® Tyto®，颠覆性的机械式分选，最大限度的保护细胞活力并呵护操作者免于气溶胶伤害。临床级别细胞制备家族CliniMACS® Plus, 临床级别的细胞分选，细胞移植的最佳伙伴！小旎亲见CliniMACS® Plus常年”出差”至全国多处实验室让客户试用，路途总是 “磕磕碰碰”，可是从来没有“生病”过，真够Robust的呢！CliniMACS® Prodigy，封闭式一体化操作系统。样品制备、细胞分选、细胞培养、过程监测、成品包装的集大成者。今年又增添”新伴侣”电转模块，一起为CAR-T细胞制备提供更多的选择。显微成像家族UltraMicroscope II光片扫描显微镜，大体积生物样本的三维立体成像，最大体积可达1cm3。不要惊讶，听说升级后的三代产品UM Blaze今年推出，样品最大体积可达13.2cm3呢!到这里，小旎只介绍了美天旎15,000多种产品的冰山一角，如果您想更了解以上设备，我们除了有免费操作体验课，另外还有园区平台提供的长期共享服务。如有需求，发送邮件到：或联系美天旎销售，美天旎中国体验中心的应用科学家们，欢迎您前来共同交流探讨！地址：上海市浦东新区张衡路1077号 ATLATL创新研发中心美天旎中国体验中心是亚太区第一个针对客户开放的技术培训与客户体验中心，中心旨在更近距离的为中国客户提供专业的技术培训、最新的产品展示和客户定制的应用开发等，依靠美天旎的专业技术助力中国生命科学领域客户的基础研究和临床试验。

　　随着单细胞测序技术的快速发展，科研工作者们可对每个独一无二的单细胞进行分析，认识到细胞间的异质性，深入了解如胚胎发育早期的分化特征、肿瘤微环境中的非均质性、罕见循环肿瘤细胞的转录组等等以往传统高通量测序方法难以攻克的领域。单细胞分析的应用已进入百花齐放的时代，涵括神经生物学、癌症、免疫学、微生物学、胚胎发育、临床诊断等多个领域。单细胞测序分析的第一步，即是单细胞样品的制备，同时确保其生物完整性不被破坏。高质量的样品制备影响着后续单细胞分析成功与否。高活性、无细胞碎片且均一的单细胞悬液可使测序结果在完整性、真实性、数据可重复性得到提升。最常见细胞分离的方法可用MACS磁珠或流式细胞仪进行目的细胞分选与富集。单细胞测序流程利用流式细胞分选法富集目的细胞群体缩小研究范围，对单细胞群体可进一步精细化解读。尤其在研究罕见细胞族群，单细胞测序前先以流式细胞分选富集稀有细胞，可大大增加实验数据真实性与可靠性。现今已有愈来愈多单细胞测序研究结合流式细胞分选，筛选目的细胞、过滤死细胞减少样本中無效细胞的比例，提高单细胞文库构建的成功率以及后续的数据质量，让单细胞测序更有深度与广度分析实验数据，推动进一步研究范畴。传统高压液滴分选仪分选单细胞传统液滴式流式细胞分选(Droplet cell sorter)，将目的细胞利用适宜的荧光标记。经荧光染色或标记的单细胞悬液，被高压压入流动室内，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。通过相应荧光检测及充电，获得目的细胞，实现单细胞分离。然而操作过程中，分选的细胞相继受到高压、充电带有电荷、减压的刺激，常导致分选的目的细胞在分类过程中的损伤和溶解，活细胞回收率不高；即使回收的活细胞也因分选过程受刺激影响细胞基因转录图谱表现，无法维持其生物完整性。传统高压液滴分选仪进行单细胞分选Adapted from Technologies for Single-Cell IsolationInt. J. Mol. Sci. 2015, 16美天旎MACSQuant® Tyto® 革命性的细胞分选仪专利的微芯片技术，精准地控制阀门开合以进行细胞分选，该仪器的特性在于整个分选过程在一次性使用的全封闭样本舱(cartridge) 中进行，且无需鞘液、避免了样本污染和残留风险。上样简单、自动进行分选设置，无需操作人员进行高强度与长时间的培训就能轻松操作。由于实际分选过程都在样本舱进行，不会损失珍贵的样本材料；阳性和阴性分选组份均可在无菌洁净操作台内轻松回收。细胞不会受到高压、电荷及减压刺激，不同于传统的液滴分选仪，这种温和的分选方法可最大保持细胞活性和功能，即使经过多次分选BOB，细胞活性也不会受影响，充分表明这种阀门介导的分选机制具有温和性质。美天旎MACSQuant® Tyto®细胞分选仪与样本舱功能示意图。A. 美天旎MACSQuant® Tyto®细胞分选仪；B. 样本舱；C.独特微芯片技术的分选示意图。单细胞测序前，使用美天旎MACSQuant® Tyto®细胞分选仪（MQ Tyto）进行目的细胞分选富集。分选过程不受到高压、电荷、减压与剪切力刺激，作用温和不影响细胞生物功能完整性，维持细胞基因转录图谱表现，提高细胞存活率与回收率。位于美国加州大学(University of California, Irvine- UCI)的Dr. Kai kessenbrock研究团队致力于研究机体正常组织内环境稳态和乳腺癌中的细胞通讯。他们在单细胞水平上系统性分析研究乳腺干细胞微环境(stem cell niche)中细胞通讯的机制和乳腺上皮組織内的异质性，进一步加深对早期肿瘤发生过程中系统性变化的理解；最终目的是开发用于早期检测的生物标记物以及改善乳腺癌的治疗策略。Dr. Kai kessenbrock团队在FVB小鼠取出小鼠乳腺组织，分别以美天旎MACSQuant® Tyto®细胞分选仪(MQ Tyto)与传统液滴式流式细胞分选(Droplet cell sorter)分离乳腺上皮细胞(CD49f+/EpCAM+)后，标记建库并进行单细胞测序；比较两种不同的流式细胞方法分选后，所获得的测序数据真实性与可靠性，也进行分选后的细胞培养，观察细胞存活与功能。小鼠乳腺上皮细胞分离与单细胞建库 (Data kindly provided by Quy Nguyen, UCI)1. MQ Tyto可有效分选出不同乳腺上皮细胞亞型（Luminal 1, Luminal 2, Basal-like subtypes），基因转录图谱完整呈现。聚类分析与差异基因热图展示2. 经由MQ Tyto分选，每个单细胞可捕获更多的mRNA数量(UMI)，获得更多可分析的基因数(Genes)；显示MQ Tyto保留了细胞的完整性。质控图3. 传统液滴式流式(Droplet cell sorter)细胞分选后细胞应激基因表现明显上调。这主要是来自于细胞分选操作过程中所受到的外力刺激，而非原始组织环境细胞的真实表现。应激基因表现量展示4. 细胞分选后，持续培养七天乳腺上皮细胞并形成乳腺球(mammosphere formation)进行计数。结果显示MQ Tyto组形成更多的乳腺球，表示其MQ Tyto分选后的上皮细胞维持其功能性与高存活率。综上，利用MQ Tyto对目的细胞进行分离与富集，作用温和不影响细胞生物功能完整性，维持细胞基因转录图谱表现，提高细胞存活率与回收率，开启单细胞测序成功的第一步。

　　肿瘤浸润白细胞( Tumor Infiltrating Leukocytes, TIL) 作为深入实体肿瘤内部的免疫细胞群体，在肿瘤-免疫学研究中占据重要地位。MACS Technology以卓越的技术致力于高质量TIL新发现，并助力肿瘤微环境研究。Agenda：肿瘤微环境与肿瘤浸润白细胞研究肿瘤浸润白细胞的目的肿瘤浸润白细胞研究的困难及挑战美天旎肿瘤浸润白细胞研究解决方案Q&A主讲人简介：田瑜博士，Ph.D., Product Manager, Miltenyi Biotec复旦大学神经生物学国家重点实验室取得博士学位，后就职于Prof. Brian Seed研究室从事单克隆抗体表达系统的研发工作。2016年进入生命科学产品营销领域，现任美天旎中国产品经理。直播时间：2020年3月26日（本周四）下午3：00—4：00报名方式：扫描上方二维码，即可报名参与！

　　抗原特异性T细胞(Antigen-specific T cells)是研究免疫系统的独特工具。一但经外来病原体或肿瘤侵入活化免疫系统，抗原特异性T细胞通过自身T细胞受体 (T cell receptor, TCR)识别肿瘤抗原，具有选择性识别肿瘤抗原、分裂增殖和持续提供长期免疫保护的能力，在治疗病毒感染疾病和恶性肿瘤方面具有许多潜在的益处；因此在肿瘤免疫治疗与疫苗开发上为一重要的细胞研究方向。  抗原特异性T细胞活化过程。T细胞经由细胞受体 (TCR) 识别多肽抗原后活化特定细胞表面标记物 (CD25, CD137, CD69 or CD154), 释放细胞因子与克隆扩增成为抗原特异性T细胞。T细胞受体(TCR)和免疫球蛋白一样，是由多个基因片段的基因重组产生的。这种重组产生了大量的T细胞，每一个都针对一种独特的多肽抗原 (peptide antigen)。T细胞对病毒、细菌、肿瘤细胞以及来自正常组织的多肽（在自身免疫性疾病中）有反应。每个多肽的特异性只在循环T细胞的一小部分中被发现，这使得抗原特异性反应的研究变得困难。如何检测抗原特异性T细胞？1细胞稀有性分析抗原特异性T细胞最困难的挑战来自于细胞的稀有性，这是因为细胞来源自不同的个体捐赠者以及多样的特异性抗原所活化后的T细胞，抗原特异性T细胞仅占所有T细胞群体里0.1 – 0.001%，属于稀有细胞群 (低频细胞)。在实验研究初期，也会因为起始材料来自不同组织来源(如肾或外周血)增加分离细胞的困难度。2不同T细胞类型，检测方法不同 CD4+T细胞识别MHC II主要组织相容性复合体，CD8+T细胞则识别MHC I主要组织相容性复合体。如前所述，因不同的MHC在选择检测方法上也有所限制。3检测细胞表面标记物与细胞因子的选择策略细胞表面标记物表现量因抗原递呈活化T细胞时间会有不同。CD69属早期活化的标记物(3-15小时)，但不仅表现在活化后的T细胞，也可在其它细胞上发现。CD137属早期活化的调节性T细胞(Treg)标记物 (4-6小时)，但可作为CD8+conventional T cell (Tcon)标记物 (16-24小时)。CD154则可作为CD4+Tcon细胞标记物(4-12小时)。同样地，细胞因子的释放也会随细胞种类不同而有不同图谱。MACSQuant® 流式细胞分析仪预富集抗原特异性CD4+T细胞深入分析埃博拉病毒疫苗诱导的循环滤泡T辅助细胞滤泡辅助T细胞(Follicular T helper cells, Tfh)为一T细胞亚群，它们被认为是B细胞最主要的辅助细胞，是淋巴组织中重要的效应T细胞亚群之一。Tfh主要的识别标记物CXCR5，是淋巴细胞进入淋巴组织B细胞室所必需的一种趋化因子受体，而其他标记如CXCR3和CCR6则被用来鉴定Tfh亚群。外周血PBMC经由埃博拉病毒片段(ZEBOV-GP)诱发APC并活化滤泡辅助T细胞(Tfh)。利用MACSQuant® 流式细胞分析仪预富集抗原特异性CD4+T细胞，再针对抗原特异性T细胞表面标记物(CD154, CXCR3, CXCR5)进行分析。滤泡辅助T细胞经埃博拉病毒片段刺激后，经预富集功能，CD4+T细胞可由2.57%提升至51.12%，增加低频细胞可分析数量，提高实验数据可信度。最终分析获得抗原特异性CXCR5+細胞亚族群 (cTfh1)细胞、CCR6 (cTfh17)与cTfh2细胞表现量。滤泡辅助T细胞经埃博拉病毒片段刺激后，经预富集功能，CD4+T细胞可由2.57%提升至51.12%，增加低频细胞可分析数量，提高实验数据可信度。滤泡辅助T细胞 流式细胞分析的圈门策略美天旎MACSQuant® 流式细胞分析仪使用预富集功能提高稀有细胞检测灵敏度MACSQuant® 流式细胞分析仪内建MACS磁力柱装置与预富集模块功能，可对低频细胞在分析前进行预富集，高灵敏度地检测稀有细胞，极大的提高了流式分析稀有细胞的能力。MACSQuant® 流式细胞分析仪预富集后分析流程将目的稀有细胞以抗体磁珠标记，再对其他分析标记物进行不同多色荧光标记(Sample treatment)，直接上样流式细胞仪(Load sample)。先使用预富集模块功能，在内建的磁力柱上富集目的稀有细胞 (MACS enrichment)，随后进行细胞分析(Flow analysis)，不因过多操作流程而损失细胞，同时获得更多分析数据。美天旎MACSQuant®16 流式细胞分析仪全自动流式细胞分析，无需手动添加标记试剂实现绝对细胞计数功能，无需其他计数微珠辅助内建MACS预富集功能，提高稀有细胞检测灵敏度如有兴趣，欢迎联系我们！电线. Guidelines for the useof flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition).Eur J Immunol. 2019 Oct;49(10):1457-19732. Circulating follicular Thelper cells and cytokine profile in humans following vaccination with therVSV-ZEBOV Ebola vaccine.Sci Rep. 2016 Jun21;6:27944